Comment séparer les constituants de la cellule ?
Séparation des constituants de la cellule: centrifugation
Principe : En broyant les cellules, on obtient un homogénat, suspension comprenant les différents organites de la cellule. Ces organites se distinguent par leur taille, leur forme, leur densité.
Spontanément, sous l'effet de la gravité, ils sédimentent, à des vitesses différentes parce que leurs tailles, forme et densité sont différentes. Mais cette sédimentation se fait très lentement. On l'accélère en centrifugeant, ce qui va revenir à augmenter la gravité. En fait c'est la force centrifuge liée à la rotation qui l'emporte sur la gravité. Dans la centrifugeuse des vitesses de plusieurs dizaines à plusieurs centaines de milliers de tours par seconde sont atteintes, produisant des accélérations de plusieurs milliers de G sur la molécule à purifier. La sédimentation se produit alors en quelques heures au lieu de plusieurs années.
La fraction liquide au dessus est nommée surnageant. Le dépôt au fond est appelé culot.
Un problème se pose dans l'utilisation d'une centrifugeuse : le déséquilibre du rotor .
Un déséquilibre de part et d'autre du rotor se traduit par une contrainte qui peut aboutir à la rupture de l'axe. Il faut donc que chaque tube ait en face de lui un tube de masse exactement égale.
Les vitesses de sédimentation étant différentes, les temps de sédimentation le sont aussi et les différents organites se déposeront au fond du tube en couches successives.
